一、5种细菌、放线菌常用培养基
1.高氏1号(淀粉硝酸钾)培养基(常用于培养、分离放线菌)
成分:可溶性淀粉20g,KNO3 1g,NaCl 0.5g,K2HPO4?3H2O 0.5g,MgSO4?7H2O 0.5g,FeSO4?7H2O 0.01g,琼脂15~20g,蒸馏水1000mL,pH7.2~7.4.
制法:配制时,先用少量冷水,将淀粉调成糊状,倒入煮沸的水中,在火上加热,边搅拌边加入其他成分,溶化后,补足水分至1000mL,0.1MPa灭菌20min。
2.LB液体培养基(用于培养细菌。常在分子生物学中应用)
成分:胰蛋白胨10g,酵母膏5g,NaCl 10g,琼脂15~18g,双蒸馏水1000mL,pH7.0.
制法:将各成分溶于1000mL双蒸馏水中,用1mol/L NaOH(约1mL)调节pH至7.0,0.1MPa灭菌20min。必要时也可在培养基中加入0.1%葡萄糖。半固体培养基加入0.4%~0.5%琼脂。
3.牛肉膏蛋白胨液体培养基(又称营养肉汤。用于培养细菌)
成分:牛肉膏3g,蛋白胨10g,NaCl 5g,蒸馏水1000mL,pH7.4.
制法:将各成分溶解于水中,以1mol/L NaOH溶液校正pH7.4,分装三角瓶(分装量以三角瓶容积的1/2~2/3为宜)或试管(分装至试管高度1/4左右为宜),0.1MPa灭菌20min后备用。
4.牛肉膏蛋白胨琼脂培养基(又称营养琼脂培养基。用于培养细菌)
成分:蛋白胨10g,牛肉膏3g,NaCl5g,琼脂15~17g,水1000mL,pH7.4.
制法:将除琼脂以外的各成分溶解于水中,以1mol/L NaOH溶液校正pH7.4,分装三角瓶(分装量以三角瓶容积的1/2~2/3为宜),而后按培养基的量加入1.5%~1.7%琼脂,0.1MPa灭菌20min后倒平板备用。若制备斜面培养基则加热煮沸使琼脂熔化,趁热分装试管(分装量以试管高度的1/5为宜),0.1MPa灭菌20min后摆成斜面备用。
5.牛肉膏蛋白胨半固体培养基(用于培养细菌)
成分:牛肉膏蛋白胨液体培养基1000mL,琼脂4~5g,pH7.4.
制法:在牛肉膏蛋白胨液体培养基中加入0.4%~0.5%的琼脂,加热溶解后,分装试管(分装量以试管高度的1/3为宜),0.1MPa灭菌20min后直立凝固备用。
二、16种乳酸菌常用培养基
6.BS培养基(用于分离双歧杆菌)
成分:蛋白胨7g,酵母粉6g,胰酶水解酪蛋白5g,大豆蛋白胨3g,多胨3g,葡萄糖10g,可溶性淀粉0.5g,吐温-801g,番茄汁200mL,肝浸液150mL,L-半胱氨酸盐酸0.5g,琼脂粉20g,溶液A10mL,溶液B5mL,BS添加液50mL,加蒸馏水至1000mL。
制法:除BS添加液外,其他成分加热溶解,调pH至7.2,115.6℃高压灭菌20min,冷至50℃时加BS添加液,混匀倾注平皿。
BS添加液:丙酸钠30g加入灭菌烧瓶中,加灭菌蒸馏水80mL,待溶解后加硫酸新霉素400mg,巴龙霉素100mg,LiCl6g,再加灭菌蒸馏水至100mL,4℃保存。
溶液A:KH2PO425g,K2HPO425g,蒸馏水250mL。
溶液B:MgSO4?7H2O10g,FeSO4?7H2O0.5g,NaCl0.5g,MnSO40.337g,蒸馏水250g。
7.番茄汁琼脂培养基(用于培养、分离、计数乳酸球菌)
成分:番茄汁原液30mL,蒸馏水970mL,蛋白胨5g,酵母膏2.5g,葡萄糖1g,乳水解酪蛋白5g,琼脂(处理)15g,pH6.5~6.8.若分离、计数乳酸菌可在培养基中加入1.6%溴甲酚紫酒精溶液1mL;若分离样品污染真菌还应加入0.15%纳他霉素(事先用2mL 0.1mol/L NaOH溶解)。
制法:将除琼脂以外的各成分溶于稀释的番茄汁中(番茄汁先调pH6.5~6.8),分装三角瓶中,按量加入1.5%琼脂,0.07MPa灭菌20min后倾注平板备用。
番茄汁制法:将新鲜番茄洗净,切碎(切勿捣碎),放入三角烧瓶,置4℃冰箱8~12h,取出后用纱布过滤,分装于三角瓶中,0.07MPa灭菌20min备用。如一次使用不完,可将其置入0℃冰箱,可保存四个月。使用时让其在常温下自然溶解。
8.改良番茄汁琼脂培养基(改良TJA培养基)(用于培养和计数乳酸菌)
成分:番茄汁50mL,酵母粉5g,牛肉膏10g,乳糖20g,葡萄糖2g,K2HPO4 2g,吐温-80 1g,乙酸钠5g,琼脂15g,水加至1000mL,pH6.8±0.2.
制法:将所有成分加入蒸馏水中,加热溶解,校正pH6.8±0.2.分装烧瓶,高压灭菌121℃15~20min。临用时加热熔化琼脂,冷至50℃时使用。
9.改良MRS琼脂培养基(用于培养、分离、计数乳酸菌)
成分一:在1000mL MRS培养基中加入5g乳酪蛋白水解物,蛋白胨加量减至5g,其他成分不变。
成分二:在1000mL MRS培养基中加入3~4g玉米浆,0.3~0.4g半胱氨酸盐酸盐,其他成分不变。
制法:同MRS培养基配法。
注:若分离乳酸菌应在改良MRS琼脂培养基中,临用时加入2%~3%CaCO3(事先用硫酸纸包好灭菌);若待分离样品污染真菌还应加入0.15%纳他霉素(事先用2mL0.1mol/L NaOH溶解)或加入0.2%山梨酸或0.5%山梨酸钾。若计数乳酸菌还应加入80μg/mL TTC(红四氮唑)指示剂。
10.酸化MRS琼脂培养基(用于分离、计数乳酸杆菌)
成分:同MRS培养基配方。
制法:将各成分按顺序煮沸溶解后,冷却至50℃,用醋酸调节pH5.4,冷却至室温(25℃),用酸度计检查,分装三角瓶中,按量加入1.5%琼脂,0.07MPa灭菌20min备用。
11.改良MRS琼脂培养基Ⅰ(用于双歧杆菌、乳杆菌和明串珠菌的分离和增殖)
成分:蛋白胨10g,牛肉膏8.0g,酵母膏4g,K2HPO4 2g,柠檬酸二铵2g,乙酸钠5g,葡萄糖20g,吐温-80 1mL,MgSO4?7H2O 0.2g,MnSO4?4H2O 0.05g,麦芽糖5g,苯乙醇0.001g,琼脂15g,蒸馏水1000mL,pH6.2~6.4.
制法:同MRS培养基配法。
12.改良CHALMERS培养基(MC培养基)(用于计数乳酸菌)
成分:大豆蛋白胨5g,牛肉浸膏5g,酵母浸膏5g,葡萄糖20g,乳糖20g,CaCO310g,1%中性红溶液5mL,琼脂15g,硫酸多黏菌素B100000IU(终浓度为100IU/mL,酌情添加),蒸馏水1000mL,pH6.0.
制法:将各成分溶解于蒸馏水中,校正pH6.0,加入1%中性红溶液,分装三角瓶中,按量加入1.5%琼脂,于121℃灭菌20min。临用时,于熔化并冷却至50℃的培养基中加入无菌过滤的硫酸多黏菌素B溶液,趁热倒平皿备用。
13.改良的TPY培养基(用于培养双歧杆菌)
成分:胰酶水解酪蛋白12g,多胨3g,大豆蛋白胨5g,葡萄糖5g,低聚果糖5g,酵母浸出粉5g,吐温-80 1g,L-半胱氨酸盐酸0.5g,牛肝浸液200mL,番茄汁100mL,混合盐溶液10mL,加蒸馏水至1000mL。
制法:将以上成分加入到蒸馏水中,使其完全溶解,调pH至7.2,分装于三角瓶中,115℃灭菌20min。
混合盐溶液:K2HPO4 20.0g,MgCl2?6H2O 5.0g,ZnSO4?7H2O 2.5g,CaCl2 1.5g,FeC13 0.5g,加蒸馏水至100mL。
上述培养基灭菌后临用前,需无菌加入混合维生素10mL。
混合维生素:维生素B1100mg,维生素B2100mg,维生素B6100mg,维生素B121mg,所有维生素均为针剂,加无菌蒸馏水至100mL。
14.MRS培养基(用于培养乳杆菌)
成分:葡萄糖20g(或10g),蛋白胨10g,牛肉膏10g,酵母膏(或干粉)5g,柠檬酸二铵2g(或柠檬酸钠5g),磷酸氢二钾2g,乙酸钠5g,MgSO4?7H2O0.58g(或0.2g),MnSO4?4H2O0.25g(或0.05g),吐温-801mL,琼脂15g,蒸馏水1000mL,pH6.2~6.4(若培养乳酸球菌则应调节pH至6.8~7.0)。
制法:将MgSO4、MnSO4、葡萄糖、吐温-80以外的各成分溶解,冷却至50℃,以醋酸调节pH6.2~6.4或pH6.8~7.0,而后加入MgSO4与MnSO4,最后加入葡萄糖和吐温-80,分装三角瓶中,按量加入1.5%琼脂,0.07MPa灭菌20min备用。
15.M17琼脂培养基(用于培养、分离、计数乳酸球菌)
成分:多聚蛋白胨(或胰蛋白胨)5g,植物蛋白胨5g,牛肉膏5g,酵母膏2.5g,β-磷酸甘油二钠19g,抗坏血酸0.5g,MgSO4?7H2O0.25g,乳糖5g,琼脂15g,pH7.1,蒸馏水1000mL,若无植物蛋白胨和胰蛋白胨,可用乳水解酪蛋白代替。
制法:将各成分溶于蒸馏水中,校正pH,分装三角瓶中,按量加入1.5%琼脂,于0.07MPa灭菌20min。
16.PTYG琼脂培养基(用于计数双歧杆菌)
成分:胰蛋白胨Tryptone(Oxoid)5g,大豆蛋白胨5g,酵母粉(Oxoid)10g,葡萄糖10g,吐温-801mL,L-半胱氨酸盐酸盐0.5g,盐溶液40mL,0.1%刃天青1mL,琼脂15~20g,pH6.8~7.0,加蒸馏水至1000mL。
制法:将以上成分加入到蒸馏水中,加热使其完全溶解,调pH至6.8~7.0,分装于三角瓶中,0.07MPa灭菌20min。
盐溶液制备:无水CaCl20.2g,K2HPO41g,KH2PO41g,MgSO4?7H2O0.48g,Na2CO310g,NaCl2g,蒸馏水1000mL先将CaCl2和MgSO4溶解于300mL水中,加500mL水后,一边搅拌,一边缓慢加入其他盐类,继续搅拌直至溶解,加200mL水,混合,于4℃备用。
17.乳清琼脂培养基(用于培养、分离乳酸球菌和杆菌)
成分:乳清500mL,蒸馏水500mL,乳水解酪蛋白5g,葡萄糖1g,酵母膏25g,琼脂(处理)15g,pH6.5.若分离、计数乳酸菌可在培养基中加入1.6%溴甲酚绿(BCG)酒精溶液1mL。
制法:将上述各成分加热溶解于乳清中,调整pH至6.5,加入经过处理的琼脂。若制斜面培养基需加热溶解琼脂,分装试管;若制平板培养基可直接移入三角瓶,并按装量加入1.5%琼脂,0.07MPa灭菌20min,倾注平板。
乳清的制备:称取乳清粉100g加入90℃的1000mL蒸馏水中溶解(先将水加热,而后加入乳清粉,以防煳底)。取6~8mL的1mol/L HCl溶液倒入上述1000mL乳清粉液中。调pH至4.5左右(最好一次调成),90℃保持30min,使酪蛋白大量析出凝结成块。用脱脂棉和纱布过滤得到乳清,再用1mol/L NaOH溶液将乳清调回pH6.5,而后煮沸,再用滤纸过滤,分装于三角瓶中,0.07MPa灭菌20min备用。
18.脱脂乳培养基(用于培养活化乳酸菌)
成分:鲜牛乳或脱脂乳粉。
制法:将鲜牛乳煮沸后,以100℃水浴保温20~30min,待冷后,装入三角瓶内;静置于冰箱内冷却过夜后,脂肪即可上浮。用虹吸法或吸管吸出底部脱脂乳,以除去上层脂肪。也可将牛乳以3000r/min离心1h,除去表面脂肪。若制备10%或15%复原脱脂乳,可将10g或15g脱脂乳粉溶于100mL水中即可。分装试管(加量为试管的1/3处)或三角瓶内。用0.07MPa灭菌20min,置于4℃冰箱保存备用。
19.X-α-半乳糖MRS琼脂培养基(用于计数双歧杆菌)
成分:胨10g,牛肉膏10g,酵母粉5g,葡萄糖20g,吐温-801mL,柠檬酸铁铵2g,硫酸镁0.1g,硫酸锰0.05g,乙酸钠5g,磷酸氢二钠2g,X-α-Gal终浓度100μmol/L,琼脂15g,蒸馏水1000mL,pH6.5±0.2.
制法:将以上各成分溶解,0.07MPa灭菌20min,然后加入X-α-Gal(5-溴-4-氯-3-吲哚α-D-半乳糖),使最终浓度达100μmol/L。
20.溴甲酚绿(BCG)牛乳琼脂培养基(用于分离乳酸菌)
成分:A溶液:脱脂乳粉100g,水500mL,加入1.6%溴甲酚绿(BCG)酒精溶液1mL,0.07MPa灭菌20min。B溶液:酵母膏10g,水500mL,琼脂15g,溶解后调节pH6.8,0.07MPa灭菌20min。
制法:以无菌操作趁热将A、B溶液混合均匀后倒入平板备用。
21.中性红白垩乳糖琼脂(用于乳与乳制品中乳酸乳球菌的检测)
成分:蛋白胨3.0g,肉汁浸膏3.0g,酵母浸膏3.0g,乳糖10.0g,碳酸钙15.0g,1%中性红溶液5mL(或用2.5mL溴甲酚紫制成溴甲酚紫白垩乳糖琼脂),琼脂15.0g,蒸馏水1L。
制法:将蛋白胨、肉汁浸膏、酵母浸膏和琼脂在蒸汽浴上加热溶解,冷却,必要时调pH至6.8,用热纸浆过滤。再加入乳糖、碳酸钙和指示剂,混匀至乳糖溶解。分装于螺帽瓶中,每瓶100mL或10mL,分装时保持碳酸钙悬浮。121℃灭菌20min。
三、10种酵母菌、霉菌常用培养基
22.察氏培养基(Czapek’smedium)(用于培养、鉴定曲霉和青霉及其他利用硝酸盐的真菌、放线菌)
成分:硝酸钠2g,磷酸氢二钾1g,MgSO4?7H2O0.5g,氯化钾0.5g,FeSO4?7H2O0.01g,蔗糖30g,琼脂15~20g,蒸馏水1000mL,pH自然或pH7.0~7.2.
制法:加热溶解,分装后,0.1MPa(121℃)灭菌20min。
注:察氏培养基又称蔗糖硝酸钠培养基,蔗糖可用葡萄糖代替而成葡萄糖硝酸盐培养基。
23.高盐(渗)察氏培养基(用于分离、计数霉菌)
成分:硝酸钠2g,磷酸氢二钾1g,MgSO4?7H2O0.5g,氯化钾0.5g,FeSO4?7H2O0.01g,氯化钠60g,蔗糖30g,琼脂15~20g,蒸馏水1000mL,pH自然。
制法:加热溶解,分装后,0.07MPa灭菌20min。必要时可酌量增加琼脂。
24.2%淀粉察氏琼脂培养基(用于培养、分离霉菌)
成分:淀粉20g,NaNO33g,KCl0.5g,K2HPO41g,FeSO40.01g,MgSO45g,琼脂15~20g,蒸馏水1000mL,pH6.7.
制法:按上述成分配制,加热溶解,校正pH,分装三角瓶,0.1MPa灭菌20min。
25.大米粉培养基(用于霉菌产毒)
制法:将不含荧光物质的籼米挑去杂质和变质米粒,磨成粗粉,分装后0.1MPa灭菌20min。
26.麦芽汁琼脂培养基(用于培养酵母菌)
成分:10°Bx或12°Bx新鲜麦芽汁1000mL,琼脂15~20g,pH5.5~6.0.若制备半固体培养基,在10°Bx或12°Bx麦芽汁中加入0.4%~0.5%琼脂。
制法:将一定量的干麦芽粉碎,加4倍于麦芽质量的60℃水,在55~65℃水浴锅中保温糖化3~4h,糖化时要不断搅拌,并每隔一定时间取样,加碘液1~2滴检查糖化程度,如显蓝色,说明糖化尚未彻底,直至碘液无蓝色反应为止。糖化完毕,用4~6层纱布过滤,除去残渣。如滤液混浊不清,可用鸡蛋清澄清。其方法是:将一个鸡蛋清加水约10mL,调匀至生泡沫,倒入糖化液中搅拌煮沸后再用纱布和脱脂棉过滤,即得澄清的麦芽汁。每1000g麦芽粉能制得15~18°Bx的麦芽汁3500~4000mL,再加水稀释成10°Bx或12°Bx的麦芽汁,用糖度计检测糖化液浓度。调节pH至5.5~6.0用于培养酵母菌。分装试管或三角瓶,如制备固体培养基,分装三角瓶后,按麦芽汁量加入1.5%琼脂。0.07MPa灭菌20min。
麦芽制法:取新鲜大麦(或小麦)若干,用水洗净,浸水6~12h后,置于15℃阴暗处发芽,上盖纱布一块,每日早、晚淋水各一次,麦根伸长至麦粒的2倍时,即停止发芽,摊开晒干或烘干,储存备用。
27.马铃薯葡萄糖(蔗糖)琼脂培养基(简称PDA,用于培养、分离、计数酵母菌和霉菌)
成分:马铃薯200g,葡萄糖(或蔗糖)20g,琼脂15~20g,蒸馏水1000mL,pH自然。
制法:将马铃薯去皮切块,称取200g加入1000mL蒸馏水,煮沸10~20min,用双层纱布素,加入1000mL培养基中,分装灭菌后可用于食品中霉菌和酵母菌的计数、分离。过滤,补加蒸馏水至1000mL。再加入糖和琼脂,加热溶化后分装,0.10MPa(121℃)灭菌15~20min。如成分中有葡萄糖宜采用0.07MPa灭菌20min。此外,用少量乙醇溶解0.1g氯霉。
28.酸化PDA(用于培养、分离、计数酵母菌和霉菌)
成分:马铃薯300g,葡萄糖20g,琼脂20g,蒸馏水1000mL,pH3.5.
制法:在PDA高压灭菌后,用10%酒石酸无菌溶液调节pH至3.5,倾注平板。必须注意,为了保证培养基中琼脂的凝固性,加酒石酸后不可再加热培养基,因为琼脂在低酸条件下分解。
29.马铃薯琼脂培养基(用于鉴定霉菌)
成分:马铃薯(去皮切块)200g,琼脂15~20g,蒸馏水1000mL,pH自然。
制法:同马铃薯葡萄糖琼脂。
30.米曲汁培养基(用于培养霉菌及酵母菌)
成分:米曲1份,米4份。
制法:用1份米曲加4份米,于55℃糖化3~4h后,煮沸过滤。米曲制备如下:
①蒸米:称取大米20g,洗净后浸泡24h,淋干,装入三角瓶,加棉塞,0.1MPa灭菌9min,至米饭完全熟透为止。
②接种培养:灭菌后,冷却至28~30℃时,以无菌操作接入米曲霉孢子,充分摇匀,置28~30℃培养24h后摇动一次,再培养5~6h后,再摇动一次,2d后米曲成熟。
31.孟加拉红培养基(用于分离、计数酵母菌和霉菌)
成分:蛋白胨5g,葡萄糖10g,磷酸二氢钾1g,MgSO4?7H2O0.5g,琼脂15~20g,1/3000孟加拉红溶液100mL,氯霉素0.1g或金霉素30μg/mL和链霉素30μg/mL,蒸馏水加至1000mL。
制法:将上述前5种成分于900mL蒸馏水中溶解后,再加入孟加拉红溶液(又称虎红,其学名是四氯四碘荧光素)。另用少量乙醇溶解氯霉素,加入培养基中。分装后0.07MPa灭菌30min。倒平板前按10mL培养基加入1mL0.03%链霉素溶液(含链霉素30μg/mL)。
四、微生物生理生化反应常用的23种培养基
32.氨基酸脱羧酶试验培养基(用于氨基酸脱羧试验)
成分:蛋白胨5g,酵母浸膏3g,葡萄糖1g,1.6%溴甲酚―醇溶液1mL或0.2%溴麝香草酚蓝水溶液12mL,L-氨基酸(或DL-氨基酸1.0g/100mL)0.5g/100mL,蒸馏水1000mL,pH6.8.
制法:除氨基酸以外的成分加热溶解后,分装每瓶100mL,分别加入各种氨基酸:赖氨酸、精氨酸和鸟氨酸。L-氨基酸按0.5%加入,DL-氨基酸按1%加入,再校正pH至6.8.对照培养基不加氨基酸,分装于小试管内,每管0.5mL,上面滴加一层液体石蜡,0.07MPa灭菌10~20min。
注:0.5g的L-赖氨酸或L-鸟氨酸应先溶解于0.5mL的15%NaOH溶液中。
33.苯丙氨酸培养基(用于苯丙氨酸脱氨试验)
成分:DL-苯丙氨酸2g(或L-苯丙氨酸1g),酵母浸膏3g,Na2HPO41g,氯化钠5g,琼脂12g,蒸馏水1000mL,pH7.4.
制法:将上述各成分混合,加热溶解,调整pH至7.4,以纱布过滤分装试管,每管3~4mL,0.07MPa灭菌20min后制成斜面。
34.醋酸铅半固体培养基(用于硫化氢试验)
成分:pH7.4的牛肉膏蛋白胨半固体琼脂100mL,硫代硫酸钠0.25g,10%醋酸铅水溶液1mL。
制法:将牛肉膏蛋白胨半固体琼脂培养基100mL加热溶解,待冷至60℃时加入硫代硫酸钠0.25g,调至pH7.2,分装于三角瓶中,0.07MPa灭菌20min。取出后,待冷至55~60℃,加入1mL无菌的10%醋酸铅水溶液,混匀后,倒入灭菌试管中。
35.童汉氏蛋白胨水(BP)培养基(用于吲哚试验。又称靛基质试验)
成分:蛋白胨(或胰蛋白胨)20g,NaCl5g,蒸馏水1000mL,pH7.4.
制法:按上述成分配制,分装小试管,0.1MPa灭菌15min。
注:蛋白胨中应含有丰富的色氨酸。每批蛋白胨买来后,应先用已知菌种鉴定后方可使用。缓冲蛋白胨水也按上述配方配制。
36.硫酸亚铁半固体培养基(用于硫化氢试验)
成分:牛肉膏3g,酵母浸膏3g,蛋白胨10g,硫酸亚铁0.2g,硫代硫酸钠0.3g,氯化钠5g,琼脂12g,蒸馏水1000mL,pH7.4.
制法:各成分加热溶解,校正pH,分装试管,0.07MPa灭菌15min,取出直立待其凝固。
注:肠杆菌科细菌测定硫化氢的产生,应采用三糖铁琼脂或本培养基。
37.6.5%氯化钠肉汤(用于乳酸菌的鉴定)
成分:肉浸液1000mL,氯化钠6.5g。
制法:将二者混合,调整pH7.6,121℃15min灭菌。
38.0.1%美蓝牛乳培养基(用于乳酸菌的鉴定)
成分:新鲜脱脂牛乳900mL,1%美蓝水溶液100mL。
制法:脱脂乳采用115℃15min灭菌,以无菌水配制1%美蓝溶液,用前混合。
39.pH9.6葡萄糖肉汤(用于乳酸菌的鉴定)
成分:普通营养肉汤1000mL,葡萄糖2g。
制法:将二者混合,调整pH9.6,121℃15min灭菌。
40.40%胆汁肉汤(用于乳酸菌的鉴定)
成分:营养肉汤600mL,葡萄糖1.2g,牛胆汁400mL。
制法:将上述成分混合,调整pH7.6,121℃15min灭菌。
41.淀粉水解培养基(用于乳酸菌的鉴定)
成分:pH7.6营养琼脂900mL,羊血清50mL,3%淀粉溶液100mL。
制法:将肉浸液琼脂溶化,待冷至50℃左右以无菌操作加入淀粉溶液及无菌羊血清混合后,倾注平板。
42.尿素培养基(用于尿素分解试验)
成分:蛋白胨1g,葡萄糖1g,氯化钠5g,KH2PO42g,0.4%酚红溶液3mL,20%尿素溶液100mL,蒸馏水1000mL,pH7.2±0.1.
制法:将除尿素以外的各成分溶于蒸馏水或去离子水中,混合后其pH约6.6,不需另行修正,装于三角瓶内,0.1MPa灭菌15min,冷却至50~55℃,加入经无菌过滤器过滤除菌的20%尿素溶液。尿素的终浓度为2%,最终pH应为7.2±0.1.分装于灭菌试管中,每管5mL。上述培养基加入2%琼脂即为尿素琼脂培养基,灭菌后,制成斜面备用。
43.牛乳琼脂(10%牛乳)(用于检测蛋白水解酶的活性)
成分:脱脂牛乳10mL,酵母浸膏琼脂或营养琼脂100mL。
制法:将牛乳加入溶化的琼脂,分装,115℃灭菌20min。也可将1mL灭菌脱脂牛乳加入10mL熔化培养基中,混匀,倒平板。
44.牛乳琼脂(30%牛乳)(用于检测酪蛋白酶的水解活性)
制法:无菌情况下,将10mL2.5%灭菌琼脂溶液与5mL无菌脱脂乳混匀,倒平板。该培养基可加在预先倒了10mL普通营养琼脂的平板上。
45.OF基础培养基(用于OF试验)
成分:蛋白胨(胰蛋白胨)2g,氯化钠5g,磷酸氢二钾0.3g,葡萄糖(或其他碳水化合物水溶液)10g,0.2%溴麝香草酚蓝水溶液12mL,琼脂3~4g,蒸馏水1000mL,pH7.1~7.2.
制法:将蛋白胨和盐类加水溶解后,校正pH至7.2,加入葡萄糖和琼脂,煮沸,溶化琼脂。然后加入指示剂,混匀后,分装试管,0.07MPa灭菌20min,直立凝固备用。
46.葡萄糖蛋白胨水培养基(用于甲基红试验和V-P试验)
成分:蛋白胨7g,葡萄糖5g,K2HPO45g,蒸馏水1000mL,pH7.0~7.2.
制法:将上述各成分溶于1000mL水中,调pH7.0~7.2,过滤。分装试管,每管10mL,0.07MPa(115℃)灭菌20min。
47.乳酸菌糖或醇发酵培养基(用于鉴定乳酸菌糖或醇发酵试验)
基础成分:蛋白胨5g,酵母粉5g,乳酪蛋白水解物(或牛肉膏)5g,柠檬酸二铵2g,醋酸钠5g,磷酸氢二钾2g,MgSO4?7H2O0.2g,MnSO4?4H2O0.2g,吐温-801mL,糖(醇)类物质10g,蒸馏水1000mL,1.6%溴甲酚紫1mL,琼脂0.5%,pH6.2~6.8.
制法:同MRS培养基配法。对于乳杆菌可调pH偏低至6.2~6.4,而乳酸球菌则应调pH6.8~7.0为宜。供乳酸菌生化鉴定的糖类有近20余种,每种糖配成10%的糖液10mL,经滤过(滤膜孔径0.25μm)除菌后,加入90mL经0.1MPa灭菌15min的上述基础培养基中,而后趁热无菌分装于小试管中(5~6mL/管),冷藏备用。如制成液体培养基,每个试管分装2mL即可。
注:乳酸菌生化鉴定糖类有葡萄糖、乳糖、蔗糖、甘露醇、D-半乳糖、山梨糖、七叶苷、木糖、阿拉伯糖、葡萄糖酸钠、麦芽糖、甘露糖、松三糖、棉子糖、鼠李糖、山梨醇、水杨苷等。
另一制法:成分:蛋白胨5g,牛肉膏5g,酵母膏5g,吐温-800.5mL,糖或醇10g,琼脂5~6g,蒸馏水1000mL,加入1.6%溴甲酚紫溶液约1.4mL调整pH6.8~7.0.分装试管,0.07MPa(115℃)灭菌20min。
48.精氨酸水解培养基(用于乳酸菌的鉴定)
成分:蛋白胨1g,氯化钠5g,磷酸氢二钾6g,L-精氨酸10g,1.6%溴甲酚紫酒精溶液14mL,琼脂3g,蒸馏水加至1000mL,pH7.2.
制法:除琼脂外的其他成分以蒸馏水混合,调整pH至7.2,加入琼脂粉,121℃15min灭菌。
49.三丁酸甘油酯琼脂(用于脂解能力的测定)
成分:三丁酸甘油酯10g,酵母浸膏琼脂或营养琼脂(pH7.5)100mL。
制法:将三丁酸甘油酯加入熔化的基础培养基,用搅拌机混合至完全乳化。分装于螺口瓶,每瓶10mL,连续3d每天用蒸汽灭菌30min。
50.石蕊牛乳培养基(用于石蕊牛乳试验)
成分:脱脂牛乳100mL,1%~2%石蕊乙醇溶液或2.5%石蕊水溶液,pH7.0.
制法:脱脂牛乳100mL(脱脂乳粉10g加入10倍水中稍加热,冷却后去上层油脂),调pH7.0,用1%~2%石蕊乙醇溶液或2.5%石蕊水溶液调牛乳至淡紫色偏蓝为止(呈紫丁香色),0.07MPa灭菌20min。如用鲜牛乳,可反复加热三次,每次加热20~30min,冷却后去除脂肪。最后一次冷却后,用吸管或虹吸法将底层乳吸出,弃上层脂肪,即为脱脂牛乳。也可煮沸置冰箱中过夜脱脂。
51.细菌糖或醇发酵培养基(用于鉴定一般细菌糖或醇发酵试验)
成分:蛋白胨10g,NaCl5g,磷酸氢二钾0.2g,蒸馏水1000mL,pH7.4,1.6%溴甲酚紫乙醇溶液(简称BCP)1~2mL,葡萄糖(或其他糖、醇)10g。
制法:将蛋白胨、NaCl和磷酸氢二钾溶于蒸馏水中,校正pH,加入1.6%溴甲酚紫乙醇溶液,待呈紫色,再加入葡萄糖(或其他糖,乳糖和半乳糖加15g),使之溶解,分装于试管中,最后将杜氏小管倒置放入试管中,使管内充满培养液。如制备半固体培养基,需加琼脂粉末5~6g,分装试管高度4~5cm。0.07MPa(115℃)灭菌20min。常用的糖或醇类,如葡萄糖、麦芽糖、蔗糖、甘露糖、甘露醇、乳糖、半乳糖等(后两种糖的用量常加大至15g)。注意:试管必须清洗干净,避免结果混乱。
52.西蒙氏柠檬酸盐培养基(用于柠檬酸盐利用试验)
成分:NH4H2PO41g,K2HPO41g,NaCl5g,MgSO4?7H2O0.2g,柠檬酸钠5g,琼脂15~20g,蒸馏水1000mL,1%溴麝香草酚蓝乙醇溶液(简称BTB)10mL或0.2%溴麝香草酚蓝水溶液40mL,pH6.8.
制法:先将盐类溶解于水中,校正pH,再加琼脂加热溶化,然后加入BTB指示剂,摇匀,分装试管,0.1MPa灭菌15min后,制成斜面。培养基的pH不要偏高,制成后以浅绿色为宜。
53.硝酸盐培养基(用于好氧菌硝酸盐还原试验)
成分:硝酸钾(分析纯)1~2g,蛋白胨10g,氯化钠5g,蒸馏水1000mL,pH7.4.
制法:将上述各成分溶解,校正pH,分装试管4~5支,每管约5mL,0.1MPa,灭菌15min。
另一成分配方:硝酸钾0.2g,蛋白胨5g,蒸馏水1000mL,pH7.4.制法同上。
注:适用于厌氧菌的硝酸盐还原试验用培养基成分如下:
成分:硝酸钾(分析纯)10g,磷酸氢二钠2.0g,蛋白胨20g,葡萄糖1.0g,蒸馏水1000mL。
54.芽孢菌糖或醇发酵培养基(用于鉴定产芽孢细菌糖或醇发酵试验)
成分:(NH4)2HPO41g,KCl0.2g,MgSO4?7H2O0.2g,酵母膏0.2g,琼脂5~6g,糖或醇类10g,蒸馏水1000mL,1.6%溴甲酚紫乙醇溶液(简称BCP)1~2mL,pH7.4.
制法:同上,分装试管,培养基高度4~5cm,0.07MPa(115℃)灭菌20min。
五、原生质体融合用培养基
55.乳糖中性红培养基(用于双歧杆菌原生质体融合的检测)
成分:蛋白胨20g、乳糖100g、酵母膏10g、0.5%中性红5mL、蒸馏水1L、pH7.2.
选择性培养基成分:乳糖中性红培养基1L、甘露醇91g、琼脂18g。
制法:上述培养基用0.1MPa灭菌20min。
56.YPD完全培养基(用于酵母菌原生质体融合)
成分:酵母粉(膏)10g,蛋白胨20g,葡萄糖20g,琼脂15~20g,蒸馏水1000mL,pH6.5.
制法:将上述各成分溶解于蒸馏水中,分装三角瓶和试管,0.07MPa(115℃)灭菌20min后,倾注平板和制成斜面试管。
固体完全培养基:YPD+2%的琼脂。
再生YPD:YPD1L、甘露醇91g、葡萄糖10g、琼脂18g。
57.再生TPY培养基(用于双歧杆菌原生质体再生)
成分:培养基PYG1L、甘露醇91g、葡萄糖10g、琼脂18g。
制法:上述培养基用0.1MPa灭菌20min。
六、食品中微生物检测用15种培养基
58.CPS培养基(用于水生细菌的分离和计数)
成分:水溶性酪蛋白(Merck)0.5g,蛋白胨(Difco)0.5g,可溶性淀粉0.5g,磷酸氢二钾0.2g,水合硫酸镁(MgSO4?7H2O)0.05g,0.01%氯化铁4滴,甘油1mL,琼脂15.0g,蒸馏水1L,pH7.2~7.0.
制法:蒸汽加热溶解酪蛋白、蛋白胨、淀粉和琼脂于蒸馏水中,趁热加入其他成分,混匀,过滤。按需分装,121℃灭菌20min。
59.Crossley乳蛋白胨培养基(用于罐装炼乳的无菌检测)
成分:脱脂乳粉100g,蛋白胨10.0g,0.01%溴甲酚紫10mL,蒸馏水1L。
制法:用蒸馏水将乳粉调成糊状,边搅拌边慢慢加入其余的水,再加入蛋白胨和溴甲酚紫。分装试管,每管10mL或按需分装。121℃灭菌5min,连续2d每天蒸汽加热30min。使用前,37℃保温2d、30℃保温2d,做无菌试验。
60.高盐甘露醇(MSA)琼脂培养基(用于分离计数葡萄球菌和微球菌)
成分:牛肉浸膏1g,胨No。3(Difco)10g,D-甘露醇10g,NaCl75g,琼脂约13g,酚红0.025g,蒸馏水1000mL,pH7.2~7.6.
制法:按量将各成分(酚红除外)混合,加热使其完全溶解,调pH至7.2~7.6,加1%的酚红溶液2.5mL,混匀。0.1MPa灭菌15min。
61.酵母浸膏乳琼脂(作为非选择性培养基,用于乳及乳制品中细菌的检测)
成分:酵母浸膏3.0g,蛋白胨5.0g,琼脂15.0g,新鲜乳或脱脂乳10.0g,蒸馏水1000mL。
制法:将酵母浸膏和蛋白胨加入蒸馏水中蒸汽浴加热溶解,冷却,pH调至7.4,加入琼脂和牛乳,121℃灭菌20min。趁热用热纸浆过滤,50℃测试滤液的pH,pH调至7.0.分装,121℃灭菌15min。培养基在室温下的最终pH为7.2.
培养基过滤用纸浆的制法:在一个大烧杯中将两张46cm×57cm的滤纸浸泡于水中并捣成浆,用布氏漏斗抽滤。换一个新的接液瓶,立即过滤琼脂培养基。
62.酵母浸膏乳酸盐肉汤(用于丙酸菌的分离和检测)
成分:酵母浸膏5.0g,乳酸钠20.0g,蒸馏水1000mL。
制法:将上述成分溶解于蒸馏水中,pH调至7.0,分装,121℃灭菌20min。
如不使用乳酸钠,可加入6.2gNaOH及14g乳酸代替;也可将乳酸用155mL1mol/LNaOH中和,加水至1L后代替。
每升加入3g琼脂可用作半固体培养基,每升加入15g琼脂可制成固体培养基。
63.结晶紫红四氮唑琼脂(选择性培养基用于检测食品中的G-嗜冷菌,简称CVT培养基)
成分:pH7.4营养琼脂1000mL,0.1%结晶紫乙醇溶液1mL,1%红四氮唑(TTC)溶液5mL。
制法:溶化营养琼脂,加入0.1%结晶紫乙醇溶液1mL,使其最终浓度为1mg/L于0.1MPa灭菌15min。称取0.1gTTC溶于10mL蒸馏水中,过滤除菌。以无菌操作向溶化并冷却至46~50℃的1L营养琼脂中加入1%无菌TTC溶液5mL,使其最终浓度为50mg/L,倾注平板。
64.酪蛋白大豆蛋白胨琼脂(用于检测食品中的耐热菌、嗜冷菌)
成分:酪蛋白的胰酶消化物或胰蛋白胨15g,大豆蛋白胨5g,氯化钠5g,琼脂15g,蒸馏水1000mL,pH7.3±0.2.
制法:将各成分加入1000mL蒸馏水中,加热并时常搅拌,煮沸约1min使各成分完全溶解,冷却至25℃,校正pH7.3±0.2,0.1MPa灭菌15min。
65.氯化钠琼脂(用于Ames法对诱变剂与致癌剂的检测)
成分:氯化钠0.5g,优质琼脂0.6g,蒸馏水90mL。
制法:成分混合,加热溶化后,分装小试管,每支装3mL0.05MPa灭菌20min。
66.乳糖胆盐发酵培养基(用于测定食品、水体中的大肠菌群)
成分:蛋白胨20g,牛胆盐5g(或猪、羊),乳糖10g,1.6%溴甲酚紫酒精溶液(BCP)0.6mL(或0.04%溴甲酚紫水溶液25mL),蒸馏水1000mL,pH7.4.
制法:将蛋白胨、胆盐及乳糖溶于水中,校正pH,加入指示剂,分装试管(预先放入1个杜氏小倒管),每管10mL,0.07MPa灭菌15~20min。
注:双料乳糖胆盐发酵培养基除蒸馏水外,其他成分按2倍用量配制;3倍浓缩乳糖胆盐发酵培养基除蒸馏水外,其余成分按3倍用量配制。分装每瓶50mL或每管5mL,并放入小倒管。用于水中大肠菌群初发酵试验。
67.乳糖发酵培养基(用于测定食品、水体中的大肠菌群)
成分:蛋白胨20g,乳糖10g,1.6%溴甲酚紫酒精溶液(BCP)0.6mL(或0.04%溴甲酚紫水溶液25mL),蒸馏水1000mL,pH7.4.
制法:将蛋白胨及乳糖溶于水中,校正pH,加入指示剂,按检验要求分装30mL、10mL或3mL,并预先放入1个杜氏小倒管,0.07MPa灭菌15~20min。
(1)双料乳糖发酵管除蒸馏水外,其他成分加倍。
(2)30mL和10mL乳糖发酵管专供酱油及酱类检验用,3mL乳糖发酵管供大肠菌群证实试验用。
68.乳糖半固体发酵培养基(用于测定水体中的大肠菌群)
成分:蛋白胨20g,乳糖10g,琼脂5g,1.6%溴甲酚紫酒精溶液(BCP)0.6mL(或0.04%溴甲酚紫水溶液25mL),蒸馏水1000mL,pH7.4.
制法:将蛋白胨、乳糖、琼脂溶于水中,校正pH,加入指示剂,分装试管(10mL/管),0.07MPa(115℃)灭菌15~20min。
69.上层培养基(用于Ames法对诱变剂与致癌剂的检测)
成分:氯化钠0.5g,优质琼脂0.6g,蒸馏水90mL,组氨―物素混合液10mL。
制法:在氯化钠、琼脂和蒸馏水中加入10mL组氨―物素混合液,摇匀后分装小试管80支,每支3mL,0.05MPa灭菌15min。
组氨―物素混合液配法:L-盐酸组氨酸31mg,生物素49mg,溶于40mL蒸馏水,备用。
70.下层培养基(用于Ames法对诱变剂与致癌剂的检测)
成分:葡萄糖20g,柠檬酸2g,K2HPO4?3H2O3.5g,MgSO4?7H2O0.2g,优质琼脂12g,蒸馏水1000mL,pH7.0,分装于三角瓶,0.07MPa灭菌20min。
制法:将以上成分溶于蒸馏水中,校正pH,分装于三角瓶中,按量加入1.2%优质琼脂,0.07MPa灭菌20min。
71.伊红美蓝(EMB)琼脂培养基(用于大肠杆菌、志贺氏菌等肠道菌的分离与鉴定)
成分:蛋白胨10g,乳糖10g,磷酸氢二钾2g,琼脂17g,2%伊红Y水溶液(署红)20mL,0.65%美蓝溶液(亚甲基蓝)10mL,蒸馏水1000mL,pH7.4.
制法:将蛋白胨、磷酸盐和琼脂溶于蒸馏水中,校正pH,分装于三角瓶内,0.1MPa灭菌15min备用。临用时加入乳糖,并熔化琼脂,冷却至50~55℃,加入伊红和美蓝溶液,摇匀,倾注平板。可使用商品EMB琼脂粉状培养基。
72.远藤氏琼脂培养基(用于测定水体中的大肠菌群)
成分:蛋白胨10g,牛肉浸膏5g,酵母浸膏5g,乳糖10g,K2HPO43.5g,无水亚硫酸钠5g,5%碱性复红乙醇溶液20mL,琼脂15~20g,蒸馏水1000mL,pH7.2~7.4.
制法:先将蛋白胨、牛肉浸膏、酵母浸膏和琼脂加入到900mL水中,加热溶解,再加入K2HPO4,溶解后补充水至1000mL,校正pH。随后加入乳糖,混匀溶解后,于0.07MPa(115℃)灭菌20min。再称取亚硫酸钠至一无菌空试管中,用少许无菌水使其溶解,在水浴中煮沸10min后,立即滴加于20mL5%碱性复红乙醇溶液中,直至深红色转变为淡粉红色或无色为止。将此混合液全部加入到上述已灭菌的并仍保持溶化状态的培养基中,混匀后立即倒平板,待凝固后存放冰箱中备用,储藏时间不宜超过2周。若培养基颜色由淡红变为深红,则不能再用。
注:远藤氏琼脂培养基又称复红亚硫酸钠培养基,碱性复红又称碱性品红。
另一配方:营养琼脂培养基100mL,20%乳糖水溶液5mL,碱性复红原液0.3mL,10%无水亚硫酸钠(Na2SO3)2.5mL。
制法:将灭菌的乳糖溶液及碱性复红原液加入已溶解的营养琼脂培养基内,再滴加无水亚硫酸钠溶液,直至培养基变成淡红色或无色为止,即可倒成平板使用。
七、食品中致病菌检验用44种培养基
73.Baird-Parker氏培养基(用于金黄色葡萄球菌检验)
成分:胰蛋白胨10g,牛肉膏5g,酵母膏1g,丙酮酸钠10g,甘氨酸12g,氯化锂(含6H2O)5g,琼脂20g,蒸馏水950mL,pH7.5.
制法:将各成分加入到蒸馏水中,加热煮沸至完全溶解,冷却至25℃,校正pH。分装每瓶95mL,0.10MPa(121℃)高压蒸汽灭菌15min。临用时加热熔化琼脂,冷却至50~60℃,每95mL加入预热至50℃的卵黄亚碲酸钾增菌剂5mL,摇匀后倾注平板。培养基应是致密不透明的。使用前在4℃冰箱储藏不得超过48h。
增菌剂制法:30%卵黄盐水50mL与除菌过滤的1%亚碲酸钾溶液10mL混合,保存于4℃冰箱内。
74.半固体琼脂(用于致病性大肠杆菌检验)
成分:蛋白胨1g,牛肉膏0.3g,氯化钠0.5g,琼脂0.4g,蒸馏水100mL,pH7.4.
制法:按以上成分配好,煮沸使其溶解,并校正pH。分装小试管,0.10MPa(121℃)高压蒸汽灭菌15~20min,直立凝固备用。
注:供动力观察、菌种保存、H抗原位相变异试验等用。
75.庖肉培养基(用于肉毒梭菌检验)
成分:牛肉浸液1000mL,蛋白胨30g,酵母膏5g,磷酸二氢钠5g,葡萄糖3g,可溶性淀粉2g,碎肉渣适量,pH7.8.
制法:称取新鲜除脂肪和筋膜的碎牛肉500g,加蒸馏水1000mL和1mol/L NaOH溶液25mL,搅拌煮沸15min,充分冷却,除去表层脂肪,澄清,过滤,加水补足至1000mL加入除碎肉渣外的各种成分,校正pH。碎肉渣经水洗后晾至半干,分装15mm×150mm试管2~3cm高,每管加入还原铁粉0.1~0.2g或铁屑少许。将上述液体培养基分装至每管内超过肉渣表面约1cm,上面覆盖熔化的凡士林或液体石蜡0.3~0.4cm。0.10MPa(121℃)高压蒸汽灭菌15min。
76.肠道菌增菌肉汤(用于致病性大肠杆菌检验)
成分:蛋白胨10g,葡萄糖5g,牛胆盐20g,磷酸氢二钠8g,磷酸二氢钾2g,煌绿0.015g,蒸馏水1000mL,pH7.2.
制法:按上述成分配好,加热使其溶解,校正pH。分装每瓶30mL,0.07MPa(115℃)灭菌15min。注意必须使用纯净的牛胆盐和煌绿,以减少对大肠杆菌的生长抑制。
77.DHL琼脂(用于沙门氏菌检验)
成分:蛋白胨20g,牛肉膏3g,乳糖10g,蔗糖10g,去氧胆酸钠1g,硫代硫酸钠2.3g,柠檬酸钠1g,柠檬酸铁铵1g,中性红0.03g,琼脂20g,蒸馏水1000mL,pH7.3.
制法:将除中性红和琼脂以外的成分溶解于400mL蒸馏水中,校正pH7.3.将琼脂于600mL蒸馏水中煮沸溶解,两液合并,并加入0.5%中性红水溶液6mL,待冷却至50~55℃,倾注平板。
78.豆粉琼脂(用于配制血琼脂培养基)
成分:牛心(或牛肉)胰蛋白酶消化汤(pH7.4~7.6)1000mL,琼脂20g,黄豆粉浸液50mL。
制法:将琼脂加于牛心消化汤内,加热溶解,过滤,加入黄豆粉浸液,分装每瓶100mL,0.10MPa(121℃)高压蒸汽灭菌15min。
黄豆粉浸液制法:取黄豆粉5g,氯化钠10g,加入蒸馏水100mL,置100℃水浴中加热1h,置于冰箱内过夜,吸取上清液,即为黄豆粉浸液。
79.Edward七叶苷结晶紫血琼脂培养基(用于动物寄生链球菌的分离)
成分:营养琼脂(pH7.4)100mL,0.05%结晶紫溶液(无菌)0.4mL,脱纤牛血(无菌)5.0mL,七叶苷5.0g。
制法:将七叶苷加入营养琼脂,连续3d每天蒸汽灭菌30min。
熔化100mL七叶苷营养琼脂,冷却至50℃,无菌加入0.4mL0.05%结晶紫溶液(预先高压或过滤灭菌),混匀,再加入5mL灭菌脱纤牛血液,完全混合后,倒于培养皿。
80.GN增菌液(用于志贺氏菌检验)
成分:胰蛋白胨20g;葡萄糖1g,甘露醇2g,柠檬酸钠5g,去氧胆酸钠0.5g,磷酸氢二钾4g,磷酸二氢钾1.5g,氯化钠5g,蒸馏水1000mL,pH7.0.
制法:按上述成分配好,加热使其溶解,校正pH。分装每瓶225ml,0.07MPa灭菌15min。
81.HE琼脂(用于志贺氏菌检验)
成分:胨12g,牛肉膏3g,乳糖12g,蔗糖12g,水杨素2g,胆盐20g,氯化钠5g,琼脂18~20g,蒸馏水1000mL,0.4%溴麝香草酚蓝溶液16mL,Andrade指示剂20mL,甲液20mL,乙液20mL,pH7.5.
制法:将前面7种成分溶解于400mL蒸馏水内作为基础液;将琼脂加入600mL蒸馏水内,加热溶解。甲液和乙液加入基础液内,校正pH。再加入指示剂,并与琼脂液合并,待冷至50~55℃,倾注平板。
注:①此培养基不可高压灭菌。②配制甲液:硫代硫酸钠34g,柠檬酸铁铵4g,蒸馏水100mL。③配制乙液:去氧胆酸钠10g,蒸馏水100mL。④Andrade指示剂:酸性复红0.5g,1mol/L NaOH溶液16mL,蒸馏水100mL。将复红溶解于蒸馏水中,加入氢氧化钠溶液。数小时后如复红褪色不全,再加氢氧化钠溶液1~2mL。
82.酵母葡萄糖肉汤琼脂(链球菌等致病菌培养)
成分:蛋白胨10.0g,肉汁浸膏10.0g,氯化钠5.0g,D-葡萄糖5.0g,酵母浸膏3.0g,琼脂15.0g,蒸馏水1000mL,pH7.0.
制法:除葡萄糖和琼脂外的其他成分加入水中,蒸汽浴加热30~60min,冷却至室温,pH调至7.0,加入琼脂溶解,121℃灭菌15min。趁热用热纸浆过滤,葡萄糖加入滤液中,溶解。按需分装,121℃灭菌15min。
83.结晶紫中性红胆盐葡萄糖琼脂(VRBGA,用于阪崎肠杆菌的检验)
成分:酵母抽取物3.0g,蛋白胨7.0g,氯化钠5.0g,胆盐(Oxoid L56产品3号)1.5g,乳糖10.0g,1%中性红溶液3mL,0.05%结晶紫溶液4mL,蒸馏水1000.0mL。
制法:将各成分加入蒸馏水中,加热并不断搅拌至沸腾,使各成分完全溶解,调节pH至7.4±0.1,115℃灭菌15min。冷却至45℃倾注直径15cm平板,可放置2~8℃冷藏柜保存,4周内使用,该培养基仅能加热熔化一次。
注:结晶紫中性红胆盐乳糖琼脂(VRBLA)只需将上述培养基中的葡萄糖替换为乳糖,其他成分和制法一致。
84.氯化镁孔雀绿(MM)增菌液(用于沙门氏菌检验)
成分:甲液:胰蛋白胨5g,氯化钠8g,磷酸二氢钾1.6g,蒸馏水1000mL;乙液:氯化镁(化学纯)40g,蒸馏水100mL;丙液:0.4%孔雀绿水溶液。
制法:分别按上述成分配好后,0.10MPa(121℃)高压蒸汽灭菌15~20min备用。临用时取甲液90mL、乙液9mL、丙液0.9mL,无菌操作混合。
85.7.5%氯化钠肉汤(用于金黄色葡萄球菌检验)
成分:蛋白胨10g,牛肉膏3g,氯化钠75g,蒸馏水1000mL,pH7.4.
制法:将上述成分加热溶解,校正pH,分装试管,0.10MPa(121℃)灭菌15~20min。
86.硫酸盐胰蛋白胨肉汤(MLST,用于阪崎肠杆菌的检验)
成分:胰酪胨20.0g,氯化钠34.22g,乳糖5.0g,磷酸氢二钾2.75g,磷酸二氢钾2.75g,月桂基硫酸钠0.1g,万古霉素0.01g,蒸馏水1000mL。
制法:除万古霉素外将各成分加入蒸馏水中,加热溶解,调节pH至6.8±0.2.121℃高压灭菌15min。万古霉素配成15mg/mL的溶液,用0.2μm的滤膜过滤除菌。临用时,取1mL万古霉素溶液加到1000mL MLST中。
87.卵黄琼脂培养基(用于肉毒梭菌检验)
基础培养基成分:肉浸液1000mL,蛋白胨15g,氯化钠5g,琼脂25~30g,pH7.5;50%葡萄糖水溶液,50%卵黄盐水悬液。
制法:制备基础培养基,分装每瓶100mL 0.10MPa(121℃)高压蒸汽灭菌15~20min。临用时加热熔化琼脂,冷至50℃,每瓶内加入50%葡萄糖水溶液2mL和50%卵黄盐水悬液10~15mL,摇匀,倾注平板。
88.麦康凯琼脂(用于致病性大肠杆菌检验)
成分:蛋白胨17g,胨3g,猪胆盐(或牛、羊胆盐)5g,氯化钠5g,琼脂17g,蒸馏水1000mL,乳糖10g,0.01%结晶紫水溶液10mL,0.5%中性红水溶液5mL。
制法:将蛋白胨、胨、胆盐和氯化钠溶解于400mL蒸馏水中,校正pH7.2.将琼脂加入600mL蒸馏水中加热溶解。将两液合并,分装于烧瓶内,0.10MPa(121℃)灭菌15~20min备用。使用时加热熔化琼脂,趁热加入乳糖,冷至50~55℃时,加入结晶紫和中性红水溶液,摇匀后倾注平板。
注:结晶紫及中性红水溶液配好后需经高压灭菌。
89.脑心浸液(BHI,用于阪崎肠杆菌的检验)
成分:犊牛脑200g,牛心肌250g,多胨10.0g,葡萄糖2.0g,氯化钠5.0g,磷酸氢二钠2.5g,蒸馏水1000mL。
制法:将除去结缔组织并绞碎的犊牛脑和牛心肌分别加水各500mL,搅拌,放入4℃左右冰箱过夜,次日取出,分别加热至60~70℃约30min,再煮沸约1h,搅拌并补充蒸发水分,防止沉渣烧焦。以纱布过滤。再将两液混合于同一容器,并补充水分至1000mL,加入其他成分,适当加热使完全溶解,调节pH7.4±0.2.再适当加热后过滤,分装,121℃灭菌15min。
90.ONPG培养基(用于沙门氏菌检验)
成分:邻硝基酚β-D-半乳糖苷(ONPG)60mg,0.01mol/L Na3PO4缓冲液(pH7.5)10mL,1%蛋白胨水(pH7.5)30mL。
制法:将ONPG溶于缓冲液内,加入蛋白胨水,过滤法除菌,分装于10mm×75mm试管中,每管0.5mL,用橡皮塞塞紧。
91.葡萄糖半固体发酵管(用于志贺氏菌检验)
成分:蛋白胨1g,牛肉膏0.3g,氯化钠0.5g,1.6%溴甲酚紫酒精溶液0.1mL,葡萄糖1g,琼脂0.3g,蒸馏水100mL,pH7.4.
制法:将蛋白胨、牛肉膏和氯化钠加入水中,校正pH后加入琼脂加热溶解,再加入指示剂和葡萄糖,分装小试管,0.10MPa(121℃)高压蒸汽灭菌15min。
92.葡萄糖铵培养基(用于志贺氏菌检验)
成分:氯化钠5g,硫酸镁(MgSO4?7H2O)0.2g,磷酸二氢铵1g,磷酸氢二钾1g,葡萄糖2g,琼脂20g,蒸馏水1000mL,0.2%溴麝香草酚蓝溶液40mL,pH6.8.
制法:先将盐类和糖溶解于水内,校正pH后加琼脂,加热溶化后加指示剂,混匀分装试管,0.10MPa(121℃)高压蒸汽灭菌15min,放成斜面。
注:容器使用前应用清洁液浸泡,再用清水、蒸馏水冲洗干净,并用新棉花做成棉塞,干热灭菌后使用。如果操作时不注意,有杂质污染时,易造成假阳性的结果。
93.氰化钾(KCN)培养基(用于肠道致病菌检验)
成分:蛋白胨10g,氯化钠5g,磷酸二氢钾0.225g,磷酸氢二钠5.64g,蒸馏水1000mL,0.5%氰化钾溶液20mL,pH7.6.
制法:将除氰化钾以外的成分配好后分装烧瓶,0.10MPa(121℃)灭菌15~20min,放在冰箱内使其充分冷却。每100mL培养基中加入0.5%氰化钾溶液2.0mL(最后浓度为1:10000),分装于12mm×100mm灭菌试管中,每管约4mL,立刻用灭菌橡皮塞塞紧,放在4℃冰箱内,至少可保存两个月。同时,将不加氰化钾的培养基作为对照培养基,分装试管备用。
注:氰化钾是剧毒药物,使用时应小心,切勿沾染,以免中毒。夏天分装培养基应在冰箱内进行。试验失败的主要原因是封口不严,氰化钾逐渐分解,产生氢氰酸气体逸出,以致药物浓度降低,细菌生长,因而造成假阳性反应。
94.5%乳糖发酵管(用于志贺氏菌检验)
成分:蛋白胨0.2g,氯化钠0.5g,乳糖5g,2%溴麝香草酚蓝水溶液1.2mL,蒸馏水100mL。
制法:除乳糖以外的各成分溶解于50mL蒸馏水内,校正pH7.4,加入溴麝香草酚蓝水溶液。将乳糖溶解于另外50mL蒸馏水内,0.10MPa(121℃)灭菌15min,将两液混合,以无菌操作分装于灭菌小试管内。
注:在此培养基内,大部分乳糖迟缓发酵的细菌可于1d内发酵。
95.肉浸液肉汤(用于金黄色葡萄球菌检验)
成分:绞碎牛肉500g,氯化钠5g,蛋白胨10g,磷酸氢二钾2g,蒸馏水1000mL。
制法:将绞碎之去筋膜无油脂牛肉500g加蒸馏水1000mL,混合后放冰箱过夜,除去液面之浮油,隔水煮沸0.5h,使肉渣完全凝结成块,用多层纱布过滤,并挤压收集全部滤液,加水补充至原量。加入蛋白胨、氯化钠和磷酸盐,溶解后校正pH7.4~7.6,煮沸并过滤,分装烧瓶,0.10MPa(121℃)高压蒸汽灭菌20~30min。
96.三糖铁(TSI)琼脂(用于肠道致病菌检验)
成分:蛋白胨20g,牛肉膏5g,乳糖10g,蔗糖10g,葡萄糖1g,氯化钠5g,硫酸亚铁铵[Fe(NH4)2(SO4)2?6H2O]0.2g,硫代硫酸钠0.2g,琼脂12g,酚红0.025g,蒸馏水1000mL,pH7.4.
制法:将除琼脂和酚红以外的各成分溶解于蒸馏水中,校正pH7.4.加入琼脂,加热煮沸,以熔化琼脂。加入0.2%酚红水溶液12.5mL,摇匀。分装试管,分装量宜多些,以便得到较高的底层。0.10MPa(121℃)高压蒸汽灭菌15~20min。放置高层斜面备用。
97.SS琼脂(用于志贺氏菌检验)
基础培养基成分:牛肉膏5g,胨5g,三号胆盐3.5g,琼脂17g,蒸馏水1000mL。
制法:将牛肉膏、胨和胆盐溶解于400mL蒸馏水中,将琼脂加热溶解于600mL蒸馏水中,再将两液混合,0.10MPa(121℃)高压蒸汽灭菌15min,保存备用。
完全培养基成分:基础培养基1000mL,乳糖10g,柠檬酸钠8.5g,硫代硫酸钠8.5g,10%柠檬酸铁溶液10mL,1%中性红溶液2.5mL,0.1%煌绿溶液0.33mL。
制法:加热熔化基础培养基,按比例加入上述染料以外之各成分,充分混合均匀,校正pH7.0,加入中性红和煌绿溶液,倾注平板。
注:制好的培养基宜当日使用,或保存于冰箱内于48h内使用,煌绿溶液配好后应在10d以内使用。
98.糖发酵管(用于志贺氏菌检验)
成分:牛肉膏5g,蛋白胨10g,氯化钠3g,磷酸氢二钠(Na2HPO4?12H2O)2g,水杨苷(或七叶苷、甘露醇、棉子糖)0.5%,0.2%溴麝香草酚蓝溶液12mL,蒸馏水1000mL,pH7.4.
制法:将上述各成分配好后,分装每瓶100mL,0.1MPa高压灭菌15min。另将水杨苷、七叶苷、甘露醇、棉子糖分别配好10%溶液,同时高压灭菌。将5mL糖溶液加于100mL培养基内,以无菌操作分装于有一个倒置小管的小试管内,用于糖发酵试验。
另一制法:将糖以外的各成分配好后,按0.5%分别加入水杨苷、七叶苷、甘露醇、棉子糖,分装有一个倒置小管的小试管内,0.05MPa灭菌20~30min。如配制葡萄糖发酵管,方法同上。
99.显色培养基琼脂(X-α-GlcA,用于阪崎肠杆菌的鉴别)
成分:蛋白胨20g,牛肉膏5g,氯化钠5g,琼脂20g,月桂基硫酸钠0.25g,5-溴4-氯-3-吲哚-α-D葡萄糖苷0.08g,蒸馏水1000mL。
制法:将各成分加入蒸馏水中,加热溶解,调节pH至7.3±0.1,分装适当容器,121℃高压灭菌3min。
100.血琼脂培养基(用于金黄色葡萄球菌检验)
成分:pH7.4~7.6豆粉琼脂100mL,脱纤维羊血(或兔血)5~10mL。
制法:加热熔化琼脂,冷却至50℃,以无菌操作加入脱纤维羊血,摇匀,倾注平板。亦可分装灭菌试管,制成斜面。亦可用其他营养丰富的基础培养基配制血琼脂培养基。
101.血琼脂(非选择性培养基,用于引起乳腺炎细菌的培养)
成分:灭菌脱纤血液5.0mL,改良营养琼脂(每1L中应含有3.5g氯化钠)100mL。马血最适合用于链球菌的培养,羊、兔或牛血也可使用。也有商品化培养基。
制法:溶解营养琼脂,冷却至40~45℃,无菌条件下加入除菌血液,混匀,倒平板。平板上先倒一层(5~10mL)基础培养基,冷却凝固后,倒血琼脂(5mL)。
102.亚硒酸盐胱氨酸(SC)增菌液(用于沙门氏菌检验)
成分:蛋白胨5g,乳糖4g,亚硒酸氢钠4g,磷酸氢二钠5.5g,磷酸二氢钾4.5g,L-胱氨酸0.01g,蒸馏水1000mL,pH7.0±0.1.
制法:将除亚硒酸氢钠和L-胱氨酸以外的各成分溶解于900mL蒸馏水中,加热煮沸,冷却备用。另将亚硒酸氢钠溶解于100mL蒸馏水中,加热煮沸,冷却,以无菌操作与上面溶液混合。再加入1%L-胱氨―氧化钠溶液1mL,分装于灭菌瓶中,每瓶100mL,校正pH7.0±0.1.
1%L-胱氨―氧化钠溶液的配法:称取L-胱氨酸0.1g(或DL-胱氨酸0.2g),加1mol/L NaOH1.5mL,使之溶解,再加入蒸馏水8.5mL即成。
103.亚硫酸铋(BS)琼脂(用于沙门氏菌检验)
成分:蛋白胨10g,牛肉膏5g,葡萄糖5g,硫酸亚铁0.3g,磷酸氢二钠4g,煌绿0.025g,柠檬酸铋铵2g,亚硫酸钠6g,琼脂20g,蒸馏水1000mL。
制法:将前面5种成分溶解于300mL蒸馏水中;将柠檬酸铋铵和亚硫酸钠另用50mL蒸馏水溶解;将琼脂于600mL蒸馏水中煮沸溶解,冷至80℃;将以上三液合并,补充蒸馏水至1000mL,校正pH7.5,加0.5%煌绿水溶液5mL,摇匀。冷至50~55℃,倾注平皿。
注:此培养基不需高压灭菌。制备过程中不宜过分加热,以免降低其选择性。应在临用前一天制备,贮存于室温暗处,超过48h不宜使用。
104.营养肉汤(NB,用于阪崎肠杆菌的检验)
成分:蛋白胨10g,牛肉粉3g,氯化钠5g,葡萄糖1g,蒸馏水1000mL。
制法:将各成分加入蒸馏水中,加热溶解,调节pH至7.4±0.1.分装,121℃高压灭菌15min。
105.TTC叠氮化钠琼脂(用于肠球菌的检验)
成分:胨(Tryptose)20g,酵母提取物(Difco)5g,葡萄糖2g,NaH2PO44.0g,叠氮化钠0.4g,氯化三苯基四唑(TTC)0.1g,琼脂15g,蒸馏水1L,pH7.2.
制法:将除TTC和琼脂外的其他成分加入蒸馏水中溶解,调整pH至7.2,加入琼脂,121℃高压灭菌15min,TTC采用过滤除菌,放入冰箱备用,在倒平板前加入。
注:叠氮化钠有剧毒!使用时应格外小心。
106.含0.6%酵母浸膏的胰酪大豆肉汤(TSB-YE)(用于单增李斯特氏菌检测)
成分:胰胨17g,多胨3g,酵母膏6g,氯化钠5g,磷酸氢二钾2.5g,葡萄糖2.5g,蒸馏水1000mL。
制法:将上述各成分加热搅拌溶解,pH调至7.2~7.4,分装,121℃灭菌15min,备用。固体培养基(TSA-YE)需另加15g琼脂,121℃灭菌15min,备用。
107.EB增菌液(用于单增李斯特氏菌检测)
成分:胰胨17g,多胨3g,酵母膏6g,氯化钠5g,磷酸氢二钾2.5g,葡萄糖2.5g,蒸馏水1000mL。1%盐酸吖啶黄溶液1.5mL,1%萘啶酮酸溶液4mL。
制法:除萘啶黄和萘啶酮酸外,其余成分加热混合,调pH至7.2~7.4,121℃高压灭菌。使用前加经过滤除菌的吖啶黄溶液和萘啶酮酸溶液。
108.李氏增菌液(LB1,LB2)(用于单增李斯特氏菌检测)
成分:胰胨5g,多胨5g,酵母膏5g,氯化钠20g,磷酸二氢钾1.35g,磷酸氢二钠12g,七叶苷1g,蒸馏水1000mL。
制法:将上述成分加热溶解,调pH至7.2~7.4,分装,121℃15min高压灭菌。
LB1225mL中加入:1%盐酸吖啶黄溶液(用灭菌蒸馏水配制)0.27mL,1%萘啶酮酸溶液(用0.005mol/L NaOH溶液配制)0.45mL。
LB2200mL中加入:1%吖啶黄溶液(用灭菌蒸馏水配制)0.5mL,1%萘啶酮酸溶液0.40mL。无菌分装于10mL大试管中。
109.改良的Mc Bride(MMA)琼脂(用于单增李斯特氏菌检测)
成分:胰胨5g,多胨5g,牛肉膏5g,氯化钠5g,葡萄糖1g,磷酸氢二钠1g,苯乙醇2.5mL,无水甘氨酸10g,氯化锂0.5g,七叶苷1g,琼脂15g,蒸馏水1000mL。
制法:将上述成分加热搅拌混匀,调pH至7.2~7.4,分装,121℃15min高压灭菌。
110.SIM动力培养基(用于单增李斯特氏菌检测)
成分:胰胨20g,多胨6g,硫酸铁铵0.2g,硫代硫酸钠0.2g,琼脂3.5g,蒸馏水1000mL。
制法:将上述各成分加热混匀,调pH7.2,分装小试管,高压灭菌121℃15min。
111.丙二酸钠培养基(用于沙门氏菌检测)
成分:酵母浸膏1g,硫酸钠2g,K2HPO40.6g,KH2PO40.4g,NaCl2g,丙二酸钠3g,0.2%溴麝香草酚蓝溶液12mL,蒸馏水1000mL,pH6.8.
制法:先将酵母浸膏和盐类溶解于水,校正pH后再加入指示剂,分装于试管内,121℃高压灭菌15min。
112.四硫酸钠煌绿(TTB)增菌液(用于沙门氏菌检测)
基础培养基成分:多胨或胨5g,胆盐1g,碳酸盐10g,硫代硫酸钠30g。
碘溶液:碘6g,碘化钾5g,蒸馏水1000mL。
制法:将基础培养基的各成分加入蒸馏水中,加热溶解,分装每瓶100mL。分装时应振摇,使其中的碳酸盐混匀。121℃高压灭菌15min备用。临用时每100mL基础培养基中加入碘溶液2mL、0.1%煌绿溶液1mL。
113.克氏双糖铁琼脂(KI)(用于致病性大肠杆菌检测)
上层培养基成分:血消化汤(pH7.6)500mL,琼脂6.5g,硫代硫酸钠0.1g,硫酸亚铁铵0.1g,乳糖5g,0.2%酚红溶液5mL。
下层培养基成分:血消化汤(pH7.6)500mL,琼脂2g,葡萄糖1g,0.2%酚红溶液5mL。
制法:
①取血消化汤按上层和下层的琼脂用量,分别加入琼脂,加热溶解。
②分别加入其他各种成分。将上层培养基分装于烧瓶内,将下层培养基分装于灭菌试管(12mm×100mm)内,每管约2mL,115℃高压灭菌10min。
③将上层培养基放在56℃水浴箱内保温;将下层培养基直立放在室温内,使其凝固。
④待下层培养基凝固后,以无菌操作将上层培养基分装于下层培养基的上面,每管约1.5mL,摆成斜面。
114.Elek氏培养基(用于沙门氏菌检测)
成分:蛋白胨20g,麦芽糖3g,乳糖0.7g,NaCl5g,40%NaOH1.5mL,蒸馏水1000mL,pH7.8.
制法:用500mL蒸馏水溶解琼脂以外的成分,煮沸,并用滤纸过滤,用1mol/L NaOH校正pH,用另外500mL蒸馏水加热溶解琼脂,将两液混合,分装于试管内,每管10mL或20mL,121℃高压灭菌15min。临用时加热熔化琼脂,倾注平板。
115.Honda氏产毒肉汤(用于致病性大肠杆菌检测)
成分:水解酪蛋白20g,酵母粉10g,NaCl 2.5g,Na2HPO415g,葡萄糖5g,微量元素0.5mL,蒸馏水1000mL,pH7.5.
制法:溶解后校正pH,121℃高压灭菌15min,待冷至45~50℃时,加入林可霉素溶液(每1mL培养基内含90μg)。
116.明胶磷酸盐缓冲液(用于肉毒梭菌检测)
成分:明胶2g,Na2HPO44g,蒸馏水1000mL,pH6.2.
制法:将各成分混合,加热溶解,校正pH,121℃灭菌15min。