以撒在父母的宠爱下长大了。一天耶和华上帝要考验亚伯拉罕，对他说：“亚伯拉罕，带上你最疼爱的独子以撒去摩利亚，在我指定的山上，把他作牲祭献给我。”听到此话，亚伯拉罕犹如五雷轰顶，但他对耶和华上帝的虔信使他毫不犹豫地去照办。
第二天一早，亚伯拉罕劈好献祭用的柴，备上驴，带着两名仆人和以撒上了路。走了三天，亚伯拉罕远远见到上帝所指定的地方，对仆人说：“你们和驴留在此处，我和孩子前去敬拜，然后回来。”亚伯拉罕让以撒背上献祭用的劈柴，自己则手持着刀和火种，一同前往。在路上，天真的以撒问：“爸爸！木柴、火种都有了，献祭的羔羊在哪里？”亚伯拉罕答道：“好孩子，上帝自己会预备。”说话间，他们到了耶和华所指定的地点。亚伯拉罕筑起祭坛，把柴堆好，抓住以撒，把他捆绑起来放在祭坛的柴堆上，然后狠狠心举起刀来要杀以撒。正当此时，耶和华的声音响了起来，他让亚伯拉罕住手，他终于知道这个世界上再也没有比亚伯拉罕对他更虔诚的人了，对于这样的人，难道他还需要更进一步的证明吗？
三天以后，他们回到了妻子身边。在这里住了一段时间后，亚伯拉罕知道他是不喜欢别士巴的，而且他常常想起夏甲和实玛利，于是他想回到以前居住的利幔平原生活。
在他们动身以前，撒拉由于年世以高，她老死了。