②受体牛的选择。理想的受体牛应该是健康的,有正常生殖和哺乳能力的母牛。一般来说,杂交母牛具有较强的生殖能力,年龄超过10岁的老牛不容易妊娠,一般不使用。移植处理前,要对受体牛进行直肠检查,以确认其是否已经怀孕,子宫和卵巢是否正常。
(2)超数排卵。在母牛发情周期的间情期,注射促性腺激素,如促卵泡素或孕马血清促性腺激素,促使卵巢内多数卵泡发育并排卵,这种方法称为超数排卵,简称超排。牛是单胎动物,超排效果明显。超数排卵理论上是越多越好,但排出的卵子数量太多,往往会出现受胎率和收集率降低的趋势。其原因可能是由于外源激素引起动物体内分泌的紊乱,排出不成熟的卵子。每个牛的卵巢排8~10个卵母细胞最合适。
(3)供体母牛的配种。经过超数排卵处理的母牛发情后应适时配种。为了得到较多的发育正常的胚胎,应使用活率高、密度大的****,而且将授精次数增加到2~3次,间隔8~10小时。
(4)胚胎的收集。利用冲洗液将胚胎由生殖道冲出,收集在器皿内。在解剖镜下用特制的玻璃细管将胚胎从冲洗液中检测出,放在盛有培养液的平皿内。胚胎收集有手术法和非手术法。牛是大家畜,可采用非手术法收集胚胎,但必须在胚胎进入子宫角以后进行。
牛胚胎的收集和移植最好在桑葚胚阶段或早期囊胚阶段,一般在配种6~8天后进行。
(5)胚胎的评定。收集到的胚胎移入培养液滴中,置于37℃恒温条件下进行形态学检查。如及时进行胚胎移植,胚胎应保持在不低于25℃的环境中。正常的胚胎,卵裂球外形整齐清晰,大小一致,分布均匀而紧密。
(6)胚胎的保存和培养。保存是使胚胎在体外一定条件下(降温)停止发育,延长生存时间。当需要时,升温后进行移植。培养是指胚胎在体外培养液中继续发育,这样也延长了体外存活时间,间接达到了短期保存的目的。
(7)胚胎移植。同采集胚胎一样,胚胎移植也有手术法和非手术法两种方式。牛一般用非手术法进行移植,使用特殊移植枪,按照直肠把握输精法将胚胎送到有黄体一侧的子宫角内。
(8)供体牛和受体牛的术后观察。胚胎移植手术后要注意供体、受体母牛的健康情况和发情表现。供体在下次发情时可照常配种,或经2~3个月再重复作为供体。受体母牛如未发情则应在适当时候作妊娠检查,如确已妊娠则需要加强饲养管理。