母獒每年发情一次，通常在秋季或冬季。发情征兆有：行为改变，兴奋性增加，活动增加，烦躁不安，犬声粗大，眼睛发亮；阴门肿胀，潮红，流出伴有血液的红色黏液；食欲减少，频频排尿，举尾拱背，喜欢接近公藏獒，常爬跨其他公藏獒等。每次发情大约持续5~12天，平均9天，少数可达21天，如果没有受孕，则间隔一定时期后开始第二次发情。两次发情的间隔时间，往往受母藏獒的年龄、体质、气候、饲养等因素的影响。通常将第一次发情开始至下次发情开始的一段时间，称为发情周期。
公獒的发情基本无规律，在母藏獒集中发情的繁殖季节，其睾丸进入功能活跃状态，当接近并嗅到发情的母藏獒的特殊气味时，便可引起兴奋，完成交配。