黄河南岸分工会于1925年6月15日正式恢复，共有会员270余人。当五卅运动发生时，该会曾经召集两次露天大会，第一次各工友捐出援助费87.9元，第二次捐出120.9元，均交京汉路总工会代为汇到上海。该会还召集全体会员，进行反奉斗争，并喊出打倒日本帝国主义列强，打倒一切反动军阀等口号，并举行有工人、学生、商人、士兵参加的游行示威。
长辛店分工会的恢复情况比较复杂。长辛店自惨案发生以后，工会分裂为三，一为交通系走狗工贼张德惠、杨德甫等成立的“长辛店铁路工会”；二为京汉铁路雇用走狗李懋银欺骗少数工人组织之“自治工会”；三为革命派工人组织的青年武术会。随着历史的发展，工人们对前两种工会的认识越来越清楚，开始攻击他们，后来京汉路总工会派人前去，动员他们纳入京汉路总工会领导。
高邑分工会在二七惨案以后，处于军阀统治之下，工人们饱尝军阀压迫之苦。虽然有组织工会的意愿，但终不能如愿。后经过多次尝试，该分会于12月5日宣告正式成立，会员有413人，纠察团21人，工作逐步展开。
2.积极开展斗争，锻炼壮大队伍
随着工会组织的建立与恢复，沉寂两年的京汉铁路工人运动开始复苏，逐渐活跃起来。与之前的工人运动相比，新成立的工会组织，工人运动的斗争策略、斗争艺术、斗争范围有了长足的进步，工会逐渐成为各地区工人运动的中坚和骨干力量。
这个时期由工会组织的较大的政治斗争是声援五卅运动。1925年5月14日，上海日商纱厂工人为了抗议日本资本家无理开除中国工人，举行了罢工。15日，日本资本家开枪打死中国工人、共产党员顾正红，打伤工人10余人。在中国共产党的号召下，上海日本纱厂2万多工人举行了大罢工。5月23日，青岛事件发生，更激起中国人民的愤怒。党组织决定5月30日在上海租界举行反帝大示威，抗议帝国主义屠杀中国人民的血腥罪行。当游行队伍经过南京路时，遭到英国巡捕的大肆屠杀，死伤数十人，造成震惊中外的五卅惨案。
五卅惨案发生后，京汉铁路工人在中国共产党的领导下，积极投入到这一反帝爱国斗争的行列中。1925年6月8日，《民国日报》登载了京汉铁路总工会发出的通电。6月18日，《京报》又登载了京汉路工人的宣言，表示誓作上海纱厂工人的后盾。在郑州，京汉路总工会举行了市民大会，李震瀛在会上讲述了上海工人被杀之详情。25日，郑州铁路工人与学生、市民300多人结队至乔家门，将亲自运销英国烟的美英烟草公司河南省经理赵仲陶绑缚游行，令其捐款2000元。信阳各界也纷纷起来，举行罢课游行。信阳铁路扶轮学校教职员发出了援助沪案意见，提出了抗议，并要求信阳市民不准购办日货。铁路工会秘书刘少猷号召成立了70多人的敢死队，准备到上海直接参加战斗。
郾城于6月23日召开了市民大会，到会工人有5000多人，会后举行了大游行。郾城铁路工人在郾城铁路工会秘书周天元领导下，组织了“沪案后援会”，组织铁路工人纠察队，焚烧了许多英、日货物，激发了广大群众反帝的热忱。并到新乡、汲县、安阳等地，宣传英、日残杀中国工人的情况，焚烧了许多英、日货。
许州铁路分工会，组织铁路工人参加了许州地区的反帝活动，并到外地宣传英、日帝国主义罪行，号召群众起来，开展反帝爱国斗争，发动群众烧毁英、日货。
武汉各界也纷纷声援五卅运动。工人示威，学生罢课，抗议帝国主义屠杀中国人民的野蛮暴行。6月10日，英商太古轮船公司的英国人将码头工人余金山头打破，工人要求惩办凶手。在举行游行时，又遭到英帝国主义的武装袭击，当场打死十余人，受伤数十人，造成了新惨案，因而激起了全国人民的愤怒。在中国共产党的领导下，武汉工人进行了声势浩大的斗争。通过这一斗争，武汉工人阶级政治上逐步成熟，斗争目标更加明确，沉重地打击了帝国主义和封建势力的反动统治，推动了武汉工人运动的发展。
京汉铁路总工会还组织工人支援了豫丰纱厂工人罢工。1925年8月7日，郑州豫丰纱厂举行了大罢工，郑州铁路总工会派去纠察队进行支援。19日，反动当局打死了京汉铁路郑州分工会纠察队2人，打伤了17名工人。为抗议这一暴行，京汉铁路总工会和纱厂工会于21日组织了抬棺游行，2000多名工人臂缠黑纱，为死难者送葬，并沿街高呼口号，沿途散发传单，要求惩办杀人凶手。事件发生后，王荷波代表全国铁路总工会发出了对豫丰纱厂的禁运令，持续两个多月，罢工最终取得了胜利，既声援了五卅运动，又推动了河南省总工会的成立。
这个时期，总工会还声援了人力车夫、码头工人的斗争。第一次国共合作，推动了武汉的工人运动。1925年2月17日，汉口人力车夫徐典拉车经过鄱阳街，撞到英租界巡捕，该巡捕当即拳打脚踢，将徐典活活打死。这一暴行激起了武汉各界人民的强烈愤怒，纷纷要求将英租界收回。在强大的压力下，英国领事被迫接受了所提四项条件，使这次斗争取得了胜利。4月，湖北省工团联合会秘密恢复，各工厂、矿区、铁路、码头、人力车夫等基层工会，纷纷加入全省工团联合会。
3．支援北伐战争，迎接革命新高潮的到来
二七惨案以后，党把每年的2月7日作为中国工人阶级争自由的纪念日，用京汉路工人不怕牺牲的革命精神，教育和鼓舞工人。京汉铁路工人，在党的教育下，特别是经过五卅运动和各地的反帝反封建斗争，觉悟提高很快，团结性、组织性大大增强，一支强大的工人运动骨干队伍逐渐成长起来，为工人运动新高潮的到来作好了思想上、组织上的准备。
1926年7月9日，在中国共产党的推动下，广东革命政府决定北伐。
当北伐军逼近武汉时，京汉路江岸分工会的一些领导人，在党的领导下，组织了铁道大队，下设运输、通讯、抢修、救护队。他们驾驶着火车，运送北伐军和枪支弹药，救护伤员，挖掘作战坑道，配合北伐军攻城，协助北伐军搜集敌人情报，收缴敌人溃逃时丢下的弹药。敌人撤退时，他们破坏铁路交通，把吴佩孚坐的火车捣翻。北伐军前进时，京汉路工人不分昼夜地铺路架桥。在架设河南境内京汉路桥梁时，曾受外国专家的赞赏。京汉铁道大队的努力，保证了北伐军的胜利前进。
反过来，北伐战争的胜利，为中国工人运动第二次高潮的到来提供了条件。这时，全国总工会移至汉口办公，李立三、刘少奇来到武汉，邓中夏、项英、林育南、许白昊、苏兆征、郭亮等到这里从事工人运动的领导工作，许多全国性的产业工会也到武汉办公，全国铁路总工会、京汉路总工会都搬到武汉，这时的武汉成了全国工人运动的中心。在中国共产党的领导下，工人运动又蓬蓬勃勃地发展起来，形成了中国工人运动的第二次高潮。