母种培养基制作流程：称样配料调节酸碱度分装灭菌摆斜面（如图10）。
图10母种培养基配置流程示意图
（1）计算、称量。选好培养基配方，按需配制的培养基的数量计算并称好各种原料的用量。
（2）配料：
第一步制取马铃薯煮汁：称取洗干净、去皮的马铃薯200克，切成薄片或削成丝（切后马上放在水中，否则马铃薯易氧化变黑）置于加有700～800毫升水的铝锅中，加热煮沸15～30分钟至薯片软而不烂，用4层纱布过滤，留滤液。
第二步煮琼脂：将称好的琼脂用200～300毫升冷水搅成糊状，边加热边搅拌至水开。
第三步混合：将马铃薯汁倒入琼脂糊内，再加入葡萄糖和其他原料（难溶者应另外溶解），用水补足总体积到1000毫升，再边煮边搅拌至煮开。煮时注意防止烧焦或溢出，烧焦的培养基营养物质被破坏，而且容易产生一些有害物质，不宜使用。
（3）调节酸碱度（pH值）。一般用10％盐酸和10％氢氧化钠调节，使其达到最适宜的pH值。调节时要小心，一滴一滴地加酸或碱，不要调得过酸性或过碱性，以免某些营养成分被破坏。生产上如使用的是中性水，一般可以不调节而直接使用。
（4）分装、塞棉塞。培养基配好后，要趁热将其分装入试管（试管要事先清洗、干燥）内，装量最好不要超过试管长的1／5，且不要使试管口上沾上培养基，若不小心沾上需用纱布擦干净，以防杂菌在试管口生长。分装后在试管口塞上棉塞。
（5）灭菌。先将塞好棉塞的试管每10支左右捆成一把，用牛心纸包好试管棉塞部分（目的是避免在灭菌过程中冷凝水打湿棉塞，并可防止接种前培养基水分散失或杂菌感染），再竖直放入手提式高压蒸汽灭菌锅内，然后在灭菌锅上面盖一层牛皮纸进行灭菌，灭菌温度达121℃，并维持25～30分钟。停火自然降压至零刻度后，打开高压锅盖，取出试管。
（6）摆斜面。将灭菌后的试管趁热摆成斜面：在桌面或培养架上平放一条厚2厘米左右的木条或铝合金条，将试管斜放在上面，使之稍倾斜，试管培养基即摆成斜面，一般斜面长度为试管的2／3即可，摆好斜面后在上面盖一层保温棉，防止试管冷却过快产生太多的冷凝水。